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HPLC分析中,樣品需要衍生化處理的目的在于將不適用于液相色譜分析的物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橐子诜治龅难苌?,通過改善化合物的物理化學(xué)性能從而改變其選擇性,提高待分析物的檢測(cè)靈敏度,常用的方法是給不能被檢測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)中加入發(fā)色團(tuán),使其能夠被檢測(cè)。柱前衍生是目前應(yīng)用廣泛的衍生技術(shù)。柱前衍生是指待測(cè)物在液相色譜分離前就完成衍生化,再根據(jù)衍生物的性質(zhì)進(jìn)行色譜分離檢測(cè),若衍生過程所用的試劑若能穩(wěn)定存在,且衍生反應(yīng)條件成熟可靠時(shí),其優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在對(duì)設(shè)備要求不高,可以人工衍生,且衍生后的副產(chǎn)物可以經(jīng)過預(yù)處...
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一、光化學(xué)衍生器的解析:1、光化學(xué)衍生方法是基于待測(cè)物質(zhì)在特殊的光化學(xué)反應(yīng)體系吸收紫外光輻射從而引起物質(zhì)的性質(zhì)或者結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,形成熒光增強(qiáng)的現(xiàn)象,使得待測(cè)物的熒光性質(zhì)發(fā)生改變來提高熒光分析的靈敏度的一種方法。2、廣泛應(yīng)用于液相色譜檢測(cè)分析,使用時(shí)置于色譜柱和檢測(cè)器之間,進(jìn)行柱后連續(xù)光化學(xué)衍生反應(yīng)提高熒光、紫外、電化學(xué)檢測(cè)和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器的靈敏度和響應(yīng)的選擇性。二、光化學(xué)衍生器的優(yōu)勢(shì):1、安裝簡(jiǎn)單,靈敏度高。2、使用時(shí)置于色譜柱和檢測(cè)器之間,進(jìn)行柱后連續(xù)光化學(xué)衍生反應(yīng)。采取液...
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氨基酸分析儀,是指用于測(cè)定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的方法。進(jìn)行氨基酸分析前,必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸。它是基于陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定的離子交換色譜儀。氨基酸分析儀由色譜柱、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄和處理系統(tǒng)組成。通常細(xì)分為兩種系統(tǒng):蛋白水解分析系統(tǒng)(鈉鹽系統(tǒng))和游離氨基酸分析系統(tǒng)(鋰鹽系統(tǒng)),利用不同濃度和pH值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰進(jìn)行梯度洗脫。其中鈉鹽系統(tǒng)一次多分析約25種氨基酸,速度較快,基線平直度好;鋰鹽系統(tǒng)一次多分析...
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一、氨基酸分析儀的組成及原理:1、氨基酸分析儀是指用于測(cè)定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的方法。進(jìn)行氨基酸分析前,必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸。2、它是基于陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定的離子交換色譜儀。由色譜柱、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄和處理系統(tǒng)組成。3、基本原理為流動(dòng)相(緩沖溶液)推動(dòng)氨基酸混合物流經(jīng)裝有陽離子交換樹脂的色譜柱,各氨基酸與樹脂中的交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換,當(dāng)用不同的pH緩沖溶液進(jìn)行洗脫時(shí)因交換能力的不同而將氨基酸混合物分離,4...
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凝膠凈化的分離原理:一個(gè)含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經(jīng)凝膠色譜柱時(shí),各分子在柱內(nèi)同時(shí)進(jìn)行著兩種不同的運(yùn)動(dòng):垂直向下的移動(dòng)和無定向的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。大分子物質(zhì)由于直徑較大,不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔,而只能分布顆粒之間,所以在洗脫時(shí)向下移動(dòng)的速度較快。小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴(kuò)散外,還可以進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中,即進(jìn)入凝膠相內(nèi),在向下移動(dòng)的過程中,從一個(gè)凝膠內(nèi)擴(kuò)散到顆粒間隙后再進(jìn)入另一凝膠顆粒,如此不斷地進(jìn)入和擴(kuò)散,小分子物質(zhì)的下移速度落后于大分子物質(zhì),從而使樣品中分子大的先流出...
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